本品系用百日咳第Ⅰ相菌種經(jīng)培育后取菌體制成懸液，加適當(dāng)殺菌劑，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋制成，每ml含菌45億～90億。用于制備百日咳菌苗、白喉、破傷風(fēng)類毒素混合制劑。
1 菌種
1.1 制造百日咳菌苗之菌種、檢定用的Ⅰ相診斷血清、百日咳分型血清及百日咳參考菌苗，由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。
1.2 菌種檢定
1.2.1 培養(yǎng)特性
于包-姜（Bordet-Gengou)氏或其他適宜的培養(yǎng)基上培育，各菌株應(yīng)具有典型的形態(tài)及生化特性。
1.2.2 血清學(xué)特性
將35～37℃培育40～48小時(shí)的菌苔，混懸于生理鹽水或磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi)，使每ml含菌20億個(gè)，與Ⅰ相血清做定量凝集反應(yīng)，凝集效價(jià)應(yīng)達(dá)到血清原效價(jià)之半。同時(shí)與單價(jià)分型血清做定量凝集反應(yīng)，其型別應(yīng)與該菌種標(biāo)定型別相同。
1.2.3皮膚壞死試驗(yàn)
用健康家兔或豚鼠至少2只，用培育40～48小時(shí)的菌苔混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi)，然后稀釋為幾個(gè)不同濃度的菌液，分別用每一稀釋度的菌液注射于家兔或豚鼠的皮內(nèi)0.1ml，經(jīng)72小時(shí)觀察反應(yīng)。如2只家兔或豚鼠中有1只注射0.4億個(gè)菌以下的菌液部位出現(xiàn)出血性壞死者為陽性反應(yīng)，判為合格。
1.2.4 毒力試驗(yàn)
用體重16～18g之小白鼠至少3組，每組至少10只，在麻醉狀態(tài)下從鼻腔滴入經(jīng)培育40～48小時(shí)，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋的菌液0.05ml觀察14天，記錄小白鼠生死情況，按Reed Muench法計(jì)算LD50，LD50菌數(shù)不超過1.2億判為合格。
1.2.5 免疫力試驗(yàn)
1.2.5.1 方法
按附錄2《百日咳菌苗原液免疫力試驗(yàn)方法》進(jìn)行。
1.2.5.2判定
試驗(yàn)菌液每個(gè)接種劑量的免疫效價(jià)應(yīng)不少于4.0IU。若試驗(yàn)菌液的效價(jià)低于此要求時(shí)，可復(fù)試，其結(jié)果的幾何平均值（如用概率分析法時(shí)，應(yīng)用加權(quán)幾何平均值)≥4.0IU，仍判為合格。
1.3 菌種保存
1.3.1 菌種應(yīng)用凍干法保存。
1.3.2 凍干菌種應(yīng)保存在2～8℃。凍干后抽樣按1.2項(xiàng)進(jìn)行檢查，合格的菌種可使用2年，以后每年檢查1次，如仍合格可繼續(xù)使用1年。
2. 制造
2.1 制造百日咳菌苗原液至少應(yīng)選用2個(gè)菌株，制成的菌苗應(yīng)含1、2、3型因子。
2.2 制造百日咳菌苗原液用活性炭半綜合培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基。如用液體培養(yǎng)基，不得含有已知引起人體毒性或變態(tài)反應(yīng)的成分。
2.3 原液制造
2.3.1 菌種
凍干菌種啟開后接種于改良包-姜氏或活性炭半綜合培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基上。于35～37℃培育不超過72小時(shí)，以后各代不超過48小時(shí)，傳代菌種保存不得超過14天，凍干菌種啟開后用于生產(chǎn)時(shí)不應(yīng)超過10代。
2.3.2 培育
可用固體法或液體法培育。培育時(shí)間不得超過48小時(shí)，經(jīng)檢查為純菌后，用適當(dāng)方法收集菌體，混懸于pH值為7.0～7.4的磷酸鹽緩沖生理鹽水中。
2.3.3 殺菌
原液可用不超過0.1%（ml /ml)m.52667788.cn/jianyan/甲醛溶液殺菌，放37℃2～3天。亦可用其他適宜的殺菌劑和殺菌方法殺菌。
2.3.4純菌試驗(yàn)
原液應(yīng)逐瓶（罐)抽樣接種普通瓊脂斜面及普通血液瓊脂斜面（或活性炭半綜合培養(yǎng)基)各1管，放35～37℃培育2天，然后放24～26℃1天。有雜菌生長者應(yīng)廢棄。
2.3.5 原液合并
固體法工藝生產(chǎn)經(jīng)純菌試驗(yàn)合格的原液應(yīng)進(jìn)行合并。不同菌株不同日期制造2的原液應(yīng)分別合并。合并后，可加適www.med126.com量防腐劑，并保存于2～8℃。
2.4 原液檢定
2.4.1 濃度測定
每瓶原液應(yīng)按中國細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量檢定部門會同測定濃度。稀釋菌苗時(shí)即按此濃度計(jì)算。
2.4.2 鏡檢
每瓶原液取樣稀釋至成品濃度，涂片染色鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陰性球桿菌。至少觀察10個(gè)視野，應(yīng)無雜菌。
2.4.3 凝集反應(yīng)
每瓶原液按1.2.2項(xiàng)與Ⅰ相血清做定量凝集試驗(yàn)，其凝集效價(jià)應(yīng)達(dá)血清原效價(jià)之半，如僅達(dá)到或低于血清原效價(jià)1/4時(shí)，應(yīng)作免疫力試驗(yàn)，合格后方可使用；同時(shí)應(yīng)用單價(jià)分型血清做定性凝集試驗(yàn)，其所含型別應(yīng)與制造原液的菌種型別相同。
2.4.4 無菌試驗(yàn)
每瓶原液除按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行無菌試驗(yàn)外，并做特異無菌試驗(yàn)。如特異無菌試驗(yàn)有百日咳菌生長，可復(fù)試一次，若仍有百日咳菌生長，原液應(yīng)判為不合格。
2.4.5 毒性試驗(yàn)
2.4.5.1方法
按附錄3《百日咳菌苗原液毒性試驗(yàn)方法》進(jìn)行。
2.4.5.2 判定
試驗(yàn)組小白鼠注射后72小時(shí)的總體重不少于注射前總體重，第7天小白鼠增加的體重不少于對照組增加體重的60%，并不得有死亡，該批原液毒性試驗(yàn)判為合格。
試驗(yàn)結(jié)果達(dá)不到上述要求，可復(fù)試一次。仍達(dá)到不過要求，可將原液放置1.2.5項(xiàng)方法及要求進(jìn)行。
2.5 原液保存
應(yīng)保存于2～8℃。原液自采集之日起至成品發(fā)出不得少于4個(gè)月。原液自采集之日起效期為3年。
