1960年，美國學(xué)者Yalow 和Berson 創(chuàng)立了放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA)，并首先用于糖尿病人血漿中胰島素含量的測定。這是醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域中方法學(xué)的一項(xiàng)重大突破，開辟了醫(yī)學(xué)檢測史上的一個(gè)新紀(jì)元。它使得那些原先認(rèn)為是無法測定的極微量而又具有重要生物學(xué)意義的物質(zhì)得以精確定量，從而為進(jìn)一步揭開生命奧秘打開了一條新的道路，使人們有可能在分子水平上重新認(rèn)識(shí)某些生命現(xiàn)象的生化生理基礎(chǔ)。其后30年中，內(nèi)分泌科學(xué)的飛速進(jìn)展，充分證m.52667788.cn/job/明了這一超威量分析技術(shù)的巨大推動(dòng)力。1977年，這項(xiàng)技術(shù)的發(fā)明者榮獲諾貝爾生物醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。隨后這一嶄新的技術(shù)迅速滲透到醫(yī)學(xué)科學(xué)的其它領(lǐng)域，如病毒學(xué)、藥理學(xué)、血液學(xué)、免疫學(xué)、法醫(yī)學(xué)、腫瘤學(xué)等，以及與醫(yī)學(xué)生物學(xué)相關(guān)的學(xué)科，如農(nóng)業(yè)科學(xué)、生態(tài)學(xué)及環(huán)境科學(xué)等。放射免疫分析的物質(zhì)，由激素?cái)U(kuò)大到幾乎一切生物活性物質(zhì)。我們放射免疫分析研究起步于1962年，并迅速發(fā)展與普及，對(duì)我國生物醫(yī)學(xué)的進(jìn)展起著很大的促進(jìn)作用。
（一)RIA的優(yōu)點(diǎn)
放射免疫分析具有許多其它分析方法無可比擬的優(yōu)點(diǎn)。它既具有免疫反應(yīng)的高特異性，又具有放射性測量的高靈敏度，因此能精確測定各種具有免疫活性的極微量的物質(zhì)。
1．靈敏度高一般化學(xué)分析法的檢出極限為10-3～10-6g,而RIA通常為10-9（毫微克，ng)、10-12g（微微克,pg)，甚至10-15g(毫微微克，fg)、10-18g(微微微克，ag)。
2．特異性強(qiáng)由于抗原—抗體免疫反應(yīng)專一性強(qiáng)，所被測物一定是相應(yīng)的抗原。良好的特異性抗體，能識(shí)別化學(xué)結(jié)構(gòu)上非常相似的物質(zhì)，甚至能識(shí)別立體異構(gòu)體。
3．應(yīng)用范圍廣據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前至少已有300多種生物活性物質(zhì)已建立了RIA。它幾乎能應(yīng)用于所有激素的分析（包括多肽類和固醇類激素)，還能用于各種蛋白質(zhì)、腫瘤抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原、寄生蟲抗原以及一些小分子物質(zhì)（如環(huán)型核苷酸等)和藥物（如地高辛、毛地黃甙等)的分析，應(yīng)用范圍還在不斷擴(kuò)展。近年來由于小分子半抗原制備抗體的技術(shù)有很大的發(fā)展，有人預(yù)測幾乎所有的生物活性物質(zhì)，只要其含量不低于RIA的探測極限，都可建立適當(dāng)?shù)腞IA法。
4．操作簡便RIA所需試劑品種不多，可制成配套試劑盒；加樣程序簡單一次能分析大量標(biāo)本，標(biāo)本用量也少；反應(yīng)時(shí)間不長；測量和數(shù)據(jù)處理易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化；RIA屬體外分析技術(shù)，對(duì)患者無任何輻射危害。
（二)RIA的缺點(diǎn)
1．只能以免疫反應(yīng)測得具有免疫活性的物質(zhì)，對(duì)具有生物活性百失去免疫活性的物質(zhì)是測不出的。因此RIA結(jié)果與生物測定結(jié)果可能不一致。
2．由于使用了生物試劑，其穩(wěn)定性受多種因素影響，需要有一整套質(zhì)量控制措施來確保結(jié)果的可靠性。
3．靈敏度受方法本身工作原理的限制，對(duì)體內(nèi)某些含量特別低的物質(zhì)尚不能測定。
4．由于放射免疫分析是競爭性的反應(yīng)，被測物和標(biāo)準(zhǔn)物都不能全部參與反應(yīng)，測得的值是相對(duì)量而非絕對(duì)量。
5．存在放射線輻射和污染等問題。
盡管RIA存在以上缺點(diǎn)，但它畢竟是定量分析方法的先進(jìn)技術(shù)。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，放射免疫分析技術(shù)將會(huì)得到更加廣泛、更加深入的發(fā)展。
放射免疫分析技術(shù)，是把放射性同位素測定與抗原、抗體間的免疫化學(xué)反應(yīng)兩種方法巧妙地結(jié)合起來所形成的一種超威量物質(zhì)的測定方法。
RIA的基本原理，是利用標(biāo)記抗原（*Ag)和非標(biāo)記抗原（Ag)對(duì)特異性抗體（Ab)發(fā)生競爭性結(jié)合。競爭結(jié)合反應(yīng)可用下式表示：
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在上述反應(yīng)系統(tǒng)中，當(dāng)只有*Ag和Ab時(shí)，只產(chǎn)生*Ag—Ab復(fù)合物，并保持可逆的動(dòng)態(tài)平衡。如反應(yīng)系統(tǒng)中同時(shí)加入Ag,因Ag 與*Ag 免疫活性完全相同，故與Ab具有www.med126.com相同的親合力。當(dāng)*Ag為一定量、Ab為有限量、Ag 與* Ag 的量之和超過Ab上的有效結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，*Ag –Ab復(fù)合物的生成量與Ag 的量之間呈一定的函數(shù)關(guān)系。即當(dāng)Ag 量少時(shí)，Ag –Ab生成量多，而*Ag –Ab生成量增多，游離的*Ag 減少�？梢�*Ag –Ab復(fù)合物生成量是受Ag含量制約的。因此，在放射免疫分析中，用已知不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)物和一定量的*Ag及限量的Ab反應(yīng)，采取一定方法將B與F分開，即可算出該標(biāo)準(zhǔn)物在各濃度下*Ag –Ab復(fù)合物的結(jié)合百分率（B/T)。
這一反應(yīng)過程，可用以下簡圖（圖8-1)說明。圖中黑圈表示標(biāo)記抗原，白圈表示非標(biāo)記抗原，長條代表抗體，每個(gè)抗體有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，標(biāo)記抗原與非標(biāo)記抗原對(duì)抗體有同等的結(jié)合能力。
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圖8-1 放射免疫分析原理示意圖
從圖中可見，當(dāng)標(biāo)記抗原與抗體量一定時(shí)，結(jié)合率（B/B+F)隨抗原量增加而降低。在實(shí)際工作中，以B/T的值為縱座標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫座標(biāo)，繪成曲線，即競爭性抑制曲線，或稱準(zhǔn)確曲線。將未知濃度的樣品按同樣條件操作，所得結(jié)合率（%)與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比，即可查出樣品中待測抗原的濃度。
放射免疫分析典型的操作程序如下：首先配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并各取一定體積；于其中加入一定量的標(biāo)記抗原和特異性抗體；在一定條件下使之反應(yīng)平衡后，采取適當(dāng)方法將B與F分離；分別測量其放射性；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖8-2)。對(duì)樣品中抗原的測定，則可在同樣條件下操作，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得含量。
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圖8-2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
左：橫座標(biāo)為等份刻度； 右：橫座標(biāo)為對(duì)數(shù)刻度
由此可見，要成功地進(jìn)行放射免疫分析，必須解決好以下3個(gè)關(guān)鍵性技術(shù)問題：
（1)標(biāo)記抗原：要求其純度高、免疫化學(xué)活性好、比放射性強(qiáng)、用量適當(dāng)。
（2)制備抗體：要求其特異性高、選用的稀釋度適當(dāng)。
（3)分離B與F：理想的分離方法應(yīng)當(dāng)是分離完全、穩(wěn)定可靠、操作簡單、適用范圍廣。
