幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp)是近年認(rèn)識(shí)的一類與胃炎、消化性潰瘍等疾病有關(guān)的微生物。眾所周知，胃炎和潰瘍屬于多發(fā)常見(jiàn)生物。眾所周知，胃炎和潰瘍屬于多發(fā)常見(jiàn)病，而Hp的生長(zhǎng)需要特殊的微需氧環(huán)境，這在一些基層實(shí)驗(yàn)室較難做到。為尋求簡(jiǎn)單、廉價(jià)而又易行的實(shí)驗(yàn)方法，我們?cè)噲D用燭缸法對(duì)胃活檢標(biāo)本中Hp的分離、鑒定并與尿素酶試驗(yàn)和涂片鏡檢對(duì)比，報(bào)告如下。
1 對(duì)象和方法
1.1 對(duì)象
1990—04～1990—10內(nèi)蒙古蒙醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院做內(nèi)鏡的所有患者，經(jīng)內(nèi)鏡檢查時(shí)均在胃竇部和球部和球部鉗取粘膜組織兩塊，放無(wú)菌小瓶?jī)?nèi)，于30min內(nèi)送檢。
1.2 方法
①培養(yǎng)與涂片：標(biāo)本采集后，立即接種于含有多粘膜素B、萬(wàn)古霉素、兩性霉素B、玉米淀粉和藥用炭末的甲氧芐嘧啶（TMP)巧克力培養(yǎng)基中。標(biāo)本接種后將組織塊在干凈玻片上反復(fù)涂抹作細(xì)菌涂片革蘭染鏡檢。②取另一塊組織放入40孔的酶標(biāo)板孔中，每孔含尿素酶試劑100μl（0.1ml)，用透明膠布封閉，置37℃溫箱，分別于1/6h，1/3h，1/2h，1/4h，12h記錄顏色出現(xiàn)變化。變?yōu)榉奂t色者為陽(yáng)性，無(wú)為化者為陰性。③生化及耐受試驗(yàn)m.52667788.cn按幽門螺桿菌（Hp)生化鑒定常規(guī)進(jìn)行。④藥敏試驗(yàn)對(duì)其中30株培養(yǎng)的細(xì)菌按常規(guī)紙片法做藥敏試驗(yàn)。
2 結(jié)果
本組資料計(jì)254例標(biāo)本，其中直接涂片165例Hp陽(yáng)性，陽(yáng)性率為65.0％。在涂片上為優(yōu)勢(shì)菌，革蘭陰性，菌體有1～2個(gè)彎曲，呈X形或螺旋形，易于識(shí)別。直接尿素酶試驗(yàn)陽(yáng)性者170份，陽(yáng)性率66.9％，從時(shí)間上看10min陽(yáng)性者占40.6％，30min占84.1％，4h為97.7％，12h即100％出現(xiàn)陽(yáng)性。涂片鏡檢中Hp的數(shù)量愈多尿素酶試驗(yàn)出現(xiàn)陽(yáng)性所要時(shí)間則愈短。254例全部進(jìn)行燭法Hp培養(yǎng)，結(jié)果有132例分離出Hp，陽(yáng)性率為52.0％。該菌在TMP巧克力培養(yǎng)基中生長(zhǎng)緩慢，3d～4d時(shí)菌落里呈圓點(diǎn)狀，直徑0.2mm～1mm，光滑，透明，無(wú)色有光澤、邊緣整齊。生化和耐受試驗(yàn)見(jiàn)表2。本研究所分離出的Hp對(duì)痢特靈、四環(huán)素、青霉素、氨芐青霉素敏感，對(duì)TMPm.52667788.cn/job/＋SMZ，多粘菌素B和奈定酸抗藥。
三種檢驗(yàn)方示比較 三種方法檢出Hp陽(yáng)性者173例，陽(yáng)性率為68.1％。尿素酶試驗(yàn)與鏡檢結(jié)果無(wú)顯著性差異（P＞0.05)，二者符合率為95.3％。尿素酶試驗(yàn)與培養(yǎng)檢出率差異有顯著性（P＜0.01)，二者符合率為77.6％，（表3，4)。
表1 直接尿素酶試驗(yàn)結(jié)果
| 觀察時(shí)間(h) | 1/6 | 1/3 | 1/2 | 1 | 2 | 4 | 12 | 24 | 總計(jì) |
| 陽(yáng)性例數(shù) | 69 | 112 | 143 | 154 | 159 | 166 | 170 | 170 | 170/254 |
表2 Hp的生化特性
| 氧化酶 | 過(guò)氧化氫酶 | 尿素酶 | 馬尿酸水解 | 1％甘氨酸耐受 | H2S產(chǎn)生紙條法 | 硝酸鹽還原 | 3.5％氯化鈉耐受 | 生長(zhǎng)溫度 | ||
| 25℃ | 37℃ | 42℃ | ||||||||
| ＋ | ＋ | ＋ | － | ＋ | ＋ | － | － | － | ＋ | － |
表3 尿素酶試驗(yàn)與鏡檢和培養(yǎng)結(jié)果比較
| 鏡 檢 | 培 養(yǎng) | ||||
| ＋ | － | ＋ | － | ||
| 尿素酶試驗(yàn) | ＋ | 162 | 8 | 132 | 38 |
| － | 3 | 81 | 0 | 84 |
P＞0.05，尿素酶試驗(yàn)與鏡檢X2＝0.22；P＜0.01，尿素酶試驗(yàn)培養(yǎng)，X2＝11.79。
表4 三種試驗(yàn)方法比較
| 指標(biāo)（％) | 尿素酶試驗(yàn) | 鏡檢 | 培養(yǎng) |
| 靈敏度 | 98.3 | 95.4 | 76.3 |
| 差異度 | 100.0 | 100.0 | 100.0 |
| 假陽(yáng)性率 | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
| 陰性率 | 1.7 | 4.7 | 23.7 |
| 陽(yáng)性預(yù)測(cè)值 | 100.0 | 100.0 | 100.0 |
| 陰性預(yù)測(cè)值 | 96.4 | 91.0 | 66.4 |
| 調(diào)整一致性 | 98.7 | 96.6 | 85.7 |
3 討論
對(duì)254例病人的胃粘膜活標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，直接尿素酶試驗(yàn)和涂片鏡檢，共檢出Hp陽(yáng)性者173例，檢出率68.1％，與國(guó)內(nèi)一些報(bào)道相符。按12h內(nèi)結(jié)果計(jì)算，尿素酶試驗(yàn)對(duì)診斷Hp感染的靈敏度為98.3％，特異試為100％，與涂片鏡檢比較二者符合率為95.3％。說(shuō)明尿素酶試驗(yàn)和涂片鏡檢對(duì)診斷Hp感染準(zhǔn)確可靠，快速敏感，簡(jiǎn)便易行。Hp是微需氧菌，一般分離鑒定需要微需氧環(huán)境，由于我們無(wú)此設(shè)備，燭缸法培養(yǎng)Hp在文獻(xiàn)上目前尚未見(jiàn)報(bào)道，我們受文獻(xiàn)的啟發(fā)，使用燭缸法，并使其保持一定的濕度和恒定的溫度。結(jié)果分離鑒定進(jìn)行比較順利，但陽(yáng)性率較尿素酶試驗(yàn)和涂片鏡檢低，故此，該方法有待繼續(xù)改進(jìn)。本研究結(jié)果說(shuō)明，燭缸法是可以用于鑒定Hp的，尤其在無(wú)微需氧設(shè)備的基層單位可應(yīng)用此法。藥敏結(jié)果顯示，該菌對(duì)痢特靈、四環(huán)素、青霉素、紅霉素、慶大霉素、氨芐青霉素敏感，所以，對(duì)伴有Hp陽(yáng)性的胃炎、胃十二指腸潰瘍病人應(yīng)首選這藥物。
本文所做工作承蒙中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物學(xué)流行病學(xué)研究所微生物研究室陳晶晶教授指導(dǎo)，分離出的Hp菌株曾送該室鑒定，復(fù)核證實(shí)，特此致謝。
